Tampão fosfato-salino

Tampão fosfato-salino ou phosphate buffered saline (abreviado PBS) é uma solução tampão comumente utilizada em bioquímica. É uma solução salina, contendo cloreto de sódio, fosfato de sódio e, em algumas formulações, cloreto de potássio e fosfato de potássio.

Tampões ácido-base, têm como finalidade manter um valor de pH praticamente constante, quando adicionados a diferentes meios. A concentração salina presente no PBS se iguala à do corpo humano (solução isotônica).

Aplicações

O PBS possui muitas aplicações, pois é isotônico (tem a mesma pressão osmótica) e não é tóxico em relação às células. Ele pode também ser utilizado para diluir diferentes substâncias, ou como uma solução para limpeza celular. Para garantir uma prolongada armazenagem a seco, de biomoléculas imobilizadas, tais como proteínas, proteínas enzimáticas etc., o PBS é usado como um diluente biomolecular, já que pode manter água em torno das biomoléculas imobilizadas em uma superfície sólida. Este fino filme de água formado, previne a desnaturação das biomoléculas ou mudanças conformacionais. Tampões carbonato podem ser também usados com a mesma finalidade, mas com menos eficácia. O PBS puro, pode ser usado como um espectro de referência, quando é determinada a absorção de proteínas por elipsometria.

O uso de aditivos pode modificar a funcionalidade de um tampão PBS. Por exemplo, o PBS com EDTA é usado para desalojar células que estejam aderidas ou agregadas em determinados sistemas. metais divalentes, como, por exemplo, o zinco, não podem ser adicionados em misturas contendo PBS, pois ocorrem precipitações. Neste caso, é possível utilizar-se outros tipos de sistemas tampão.

Preparação

Existem muitas maneiras de preparo do PBS (phosphate buffered saline). Algumas formulações não contém potássio, enquanto outras contém cálcio ou magnésio. Uma das preparações mais comuns está descrita abaixo:

A maneira mais simples para se preparar uma solução é usar o tampão PBS em comprimidos. Estes são formulados para produzir uma solução pronta para o uso, após dissolução em determinada quantidade de água destilada.

10L de uma solução-estoque de PBS 10x podem ser preparados, dissolvendo-se 800 g de NaCl, 20 g de KCl, 144 g de Na₂HPO₄ e 24 g de KH₂PO₄ em 8 L de água destilada. Após a completa dissolução, o volume final da solução é levado à 10 L, adicionando-se água destilada. O pH da solução é ~6,8, mas ao diluirmos ao valor de 1x, o pH chega a 7,4. Ao prepararmos soluções tampão, é sempre uma boa prática proceder-se a uma verificaçao final com um medidor de pH. Para o PBS, o valor de pH pode ser ajustado usando-se ácido clorídrico (HCl) ou hidróxido de sódio (NaOH).

Após diluição, o PBS 1x resultante deve ter uma concentração final de NaCl 137 mM, Fosfato 10 mM, KCl 2.7 mM, e um pH de 7.4.